作者：周亚凤,张先恩,刘虹,张成刚,Anthony E G Cass 单位：中国科学院微生物所;中国微生物学会 出版：《生物工程学报》2001年第04期 页数：6页  （PDF与DOC格式可能不同） PDF编号：PDFSHWU2001040100 DOC编号：DOCSHWU2001040109 下载格式：PDF + Word/doc 文字可复制、可编辑

    • 将黑曲霉葡萄糖氧化酶 (GOD)基因重组进大肠杆菌 酵母穿梭质粒pPIC9，转化甲基营养酵母Pichiapasto risGS115 ，构建出GOD的高产酵母工程菌株。在酵母α Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下 ，黑曲霉GOD在甲基酵母中大量表达并分泌至胞外 ，经甲醇诱导 3～ 4d ，发酵液中的GOD活力可达 30～ 40u mL。SDS PAGE证实GOD在培养物上清中的含量显著高于其它杂蛋白 ，约占胞外蛋白总量的 6 0 %～ 70 % ，经QSepharoseTM FastFlow离子交换柱一步纯化即达电泳纯。重组酵母GOD比活达 42 6 6 3u mg蛋白 ，是商品黑曲霉GOD的 1 6倍。动力学性质分析表明 ，重组酵母GOD的Km 和kcat分别为 38 2 5mmol L和 34 92 6 6s- 1 ，与商品黑曲霉GOD相比 ，具有更高的催化效率。重组酵母GOD的高活力特性可有效提高葡萄糖传感器的线性检测范围。

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