作者：温国霞,黄子豪,谭俊杰,阚乃鹏,凌婧怡,张霞,刘刚,陈惠鹏 单位：中国科学院文献情报中心;中国生物技术发展中心;中国生物工程学会 出版：《中国生物工程杂志》2017年第07期 页数：10页  （PDF与DOC格式可能不同） PDF编号：PDFSWGJ2017070170 DOC编号：DOCSWGJ2017070179 下载格式：PDF + Word/doc 文字可复制、可编辑
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    • 目的：恶臭假单胞菌中的TOL质粒上的XylR-Pu是经典的甲苯代谢通路，在甲苯类化合物存在时，调控蛋白XylR可以特异性的激活Pu启动子，进而启动相应甲苯代谢通路的表达。基于合成生物学的思想，优化设计此通路并导入遗传背景清楚、操作简单的大肠杆菌中构建全细胞生物传感器，用于检测环境污染物2，4，6-三硝基甲苯(TNT)。方法：以pETDuet-1为载体骨架，构建了XylR-Pu基因线路，并以绿色荧光蛋白GFP为报告分子，GFP的荧光值可以指征结合诱导剂后的XylR蛋白对Pu启动子的诱导强度，并在基因线路中加入四串联终止序列来降低背景值。最后对XylR蛋白的信号识别区进行连续易错PCR，构建随机突变体文库，从中筛选具有更高感应强度、更好灵敏度及特异性的调控蛋白。结果：四串联终止序列可有效降低XylR-Pu通路的背景值，随机突变体文库中筛选出的生物元件eX0-4，对TNT表现出良好的感应强度、灵敏度及特异性。结论：XylR蛋白在大肠杆菌中对硝基甲苯响应不明显，但筛选得到的突变蛋白eX0-4，为后续生物传感器的更深层次地开发提供了优良的元件储备。另外，利用易错PC.....。

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