作者：孟凡飞,刘畅,蒋栋能,张立群,蒲晓允 单位：重庆市卫生健康统计信息中心;重庆市临床检验中心 出版：《检验医学与临床》2017年第22期 页数：3页  （PDF与DOC格式可能不同） PDF编号：PDFJYYL2017220240 DOC编号：DOCJYYL2017220249 下载格式：PDF + Word/doc 文字可复制、可编辑
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    • 目的研发能特异性结合穿孔素的DNA适配体并构建适配体电化学传感器，为发展穿孔素的新型检测技术提供基础。方法体外合成全长为81个碱基并含有35个随机寡核苷酸的单链DNA文库，库容量大约为1&#215；1010，以穿孔素蛋白为靶标，利用指数富集配体系统进化技术(SELEX)，从单链DNA文库中筛选能够结合穿孔素蛋白的DNA适配体；采用M-fold程序(version 3.2)预测二级结构；设计并构建适配体电化学传感器，进行穿孔素电化学特异性检测，绘制标准曲线。结果经多轮筛选，获得6条穿孔素蛋白的DNA适配体，分别为序列SEQ1~SEQ6，适配体SEQ6能够特异性结合穿孔素，并可通过电化学方法用于检测穿孔素，而其与牛血清清蛋白、γ-干扰素、肿瘤坏死因子α结合较弱。该电化学传感器检测穿孔素的线性水平范围为1~20nmol，检出限为0.7nmol。结论成功利用SELEX筛选获得特异结合穿孔素的DNA适配体，其在研发针对穿孔素的新型检测技术方面具有应用潜能。

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