作者：曹薇薇,刘伟,王维山,陈召,何仁豪,何建伟 单位：四川大学华西医院;四川省生物医学工程学会 出版：《生物医学工程学杂志》2014年第05期 页数：5页  （PDF与DOC格式可能不同） PDF编号：PDFSWGC2014050250 DOC编号：DOCSWGC2014050259 下载格式：PDF + Word/doc 文字可复制、可编辑
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    • 转移生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号转导通路与人类的多种生理病理发生机制相关，但是该信号通路中Smad3被磷酸化的时空信息仍然不完全清楚。为了动态观察活细胞生理状态下Smad3被磷酸化的过程，首先进行ECFP-Smad3-Citrine(Smad3biosensor)融合蛋白表达载体的构建及鉴定；然后转染293T细胞并观察转染效率和融合蛋白表达情况。在荧光显微镜下，应用MetaFlour FRET 4.6软件测量TGF-β1刺激293T细胞前后Smad3biosensor的荧光能量共振转移(FRET)的变化情况。结果显示，Smad3biosensor转染效率达40%，融合蛋白表达成功。TGF-β1刺激293T细胞10min后，监测到胞质内FRET值逐渐减小，青色荧光蛋白(CFP)减弱，黄色荧光蛋白变体(Citrine)增强，历时约300s后逐渐恢复。应用FRET技术能使我们在活细胞生理状态下，实时动态监测TGF-β1/Smad3信号转导通路的过程。

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