作者：高原,邹阳,于影,林金德,张春丽,温传俊,沈干 单位：东南大学 出版：《东南大学学报(医学版)》2014年第02期 页数：5页  （PDF与DOC格式可能不同） PDF编号：PDFNJTD2014020040 DOC编号：DOCNJTD2014020049 下载格式：PDF + Word/doc 文字可复制、可编辑
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    • 目的：利用双荧光素酶报告基因系统构建可检测miR-140活性的生物传感器。方法：首先，在psiCHECK-2双荧光报告基因质粒的多克隆位点插入miR-140成熟体的4个拷贝反义序列，构建miR-140sensor。其次，将miR-140 sensor和miR-140 mimics共转染HEK-293T细胞，利用双荧光素酶报告基因系统检验miR-140 sensor的功能。最后，转染miR-140 sensor至大鼠骨髓间充质干细胞(rat MSCs)，分析在成软骨诱导中miR-140的活性变化，并与miR-140的表达水平相比较。结果：在HEK-293T细胞中，相对于阴性对照组，miR-140 sensor与miR-140 mimics共转能明显降低49%(20 nmol&#183；L-1)和65%(50 nmol&#183；L-1)的荧光活性。将转染miR-140 sensor的rat MSCs成软骨诱导7 d后，荧光活性降低43%，提示miR-140活性升高，与RT-qPCR法检测的miR-140表达水平相一致。结论：构建的miR-140 sensor是一种简单方便有效的.....。

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